Biología Práctica #4: Identificación de Proteínas

Resumen 

Como primer punto se lavó la cristalería que se iba a utilizar para el experimento, dicha cristalería constaba de 6 tubos de ensayo, 4 probetas una para cada sustancia y por último 1 beaker. Después de eso se rotularon los tubos de ensayo para diferencias las sustancia que se iban a colocar en cada tubo de los números 1 al 5, 1 para el agua, 2 para la clara de huevo, 3 para la leche entera, 4 para la leche descremada y 5 para la leche deslactosada. Luego se pusieron en orden los materiales que se iban a utilizar, la leche descremada, deslactosada, entera y el huevo, luego se midieron las cantidades necesarias de leche, agua y clara de huevo, la cual había sido disuelta en un beaker, en la probeta, 5 ml de agua, 3 ml de clara de huevo con 3 ml de agua y 5 ml de las tres clases de leche. En el siguiente paso se agregaron 5 gotas de solución Biuret en cada tubo de ensayo y se observaron los resultados. No se observó ningún cambio debido a que la solución Biuret estaba vencida. Luego se marcó una pulgada en un tubo de ensayo y se le agregó clara de huevo hasta la marco, después se colocó en un beaker una pequeña cantidad de alcohol etílico para medir 1 ml en la probeta y luego agregarlo a la clara de huevo que se encontraba en el tubo de ensayo, se observaron los resultados y se pudo ver que se empezaba a formar una sustancia espesa de color blanco por encima de la clara de huevo hasta tornarse con en una tela delgada. Finalmente se lavó la cristalería y se colocó en su lugar. 

Resultados 

(En la practica de laboratorio no ocurrió debido a que la solución Biuret estaba vencida)

1. Se nombraron los tubos de ensayo con el numero indicado para cada sustancia, 1 para el agua, 2 para la clara de huevo, 3 para la leche entera, 4 para la leche descremada y 5 para la leche deslactosada.

2. Se le agregaron 5 gotas de solución Biuret a cada sustancia.

3. Clara de huevo con alcohol etílico.

Interpretación de resultados y conclusiones

Iezid Ixmucané Letona Sabán 5B 21

Las proteínas debido al gran tamaño de sus moléculas, forman con el agua soluciones coloidales que pueden precipitar formándose coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70° C  o al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc. La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización  por los agentes indicados, que al actuar sobre la proteína la desordenan por los agentes indicados, que al actuar sobre la proteína la desordenan  por destrucción de sus estructuras terciarias y secundarias.

  La reacción de Biuret la producen los peptidos y las proteínas, pero no los aminoacidos ya que se debe a la presencia del enlace petico CO-NH que se destruye al liberarse los aminoacidos.

El reactivo de Biuret lleva sulfato de cobre (II) y sosa. El Cu, en un ambiente fuertemente alcalino, se uno con los enlaces peptidicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas.

Por lo tanto la solución de Biuret al detectar las proteínas de la leche deslactosada, descremeda y entera, y el huevo el color que debió dar tuvo ser fuerte dependiendo de la cantidad de proteínas que cada uno de estos poseía, por l tanto esto no sucedió ya que el Biuret estaba caducado. 

Similitudes

• La clara de huevo, la leche descremada, deslactosada y entera reaccionaron positiva-mente al Biuret ya que se tornaron de un color morado por la cantidad de proteínas.
• El agua y la leche tiene la misma cantidad vertida en los tubos de ensayo.
• La leche deslactosada, descremada y entera  a pesar de tener una diferencia en grasa y lactosa, todas tienen proteínas.

Diferencias

• A la clara de huevo se le tuvo que agregar agua 
• La clara del huevo a temperatura ambiente es menos espesa que la leche, debido a la diferente consistencia que poseen, la leche es liquida y el huevo es ligoso
• La leche obtuvo un color morado mas claro mientras que el color de huevo fue mas intenso debido a la cantidad de proteinas

El alcohol va desnaturalizando las proteínas del huevo, que se encuentran principalmente en la clara.  Cuando las proteínas se desnaturalizan pierden parte de su estructura molecular y por eso su aspecto cambia. Casi inmediatamente observamos que  la clara se va volviendo  blanca y sólida igual que ocurre cuando cocinamos un huevo. Y es que  el calor también desnaturaliza las proteínas.

  A su vez, el huevo se va deshidratando, el agua sale de sus tejidos y el alcohol entra. Este mismo método de deshidratación se utiliza en medicina para estudiar muestras de tejidos en el microscopio. Y hay más, porque el alcohol también disuelve los lípidos, las grasas, que se encuentran sobre todo en la yema pero que también son constituyentes junto con las proteínas de las membranas celulares

Conclusiones

• Se comprobó la reacción de Biuret en la caseína ya que esta es la proteina de la leche, y toda proteína precipita en una coloración violeta cuando se hace reaccionar con el reactivo de Biuret.
• Se evidenció el carácter proteico de la caseína ya que en la reacción de Biuret solo reaccionan proteinas y peptidos, y no aminoacidos
• Identificamos los enlaces peptídicos  (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los aminoácidos, dándonos positiva esta reacción en todos los compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos consecutivos en sus moléculas quedando en el fondo del tubo una tonalidad azul cielo.

Ramiro Alfonso Mínchez Urbina B24

La incrementacion de la solucion de Biuret es un método que detecta la presencia de compuestos con dos o más enlaces peptídicos y, por lo tanto, sirve para todas las proteínas y péptidos cortos.  se puede utilizar para determinar la cantidad de proteína soluble en una solución. El reactivo del biuret reacciona con los enlaces del péptido y cambia el color cuando entra en contacto con otra sustancia.  Mientras más cantidad de proteína esté presente en la solución, más oscuro es el color. En el caso de la leche se observo que cambio a un tono lila , violeta esto se debio a la gran presencia de proteinas que concentra la leche por el otro lado al ser puesto en contacto con el agua no hubo ningun cambio debido a que no contiene proteinas y por ultimo con la clara del huevo se observo un tono mas oscuro del mismo.(o esto es lo que debio haber pasado XD).

Similitudes:
. La leche y la clara actuaron positivamente con la solucion de Biuret, por su precencia de proteinas (lo cual no paso).
. Todos los ingedientes fueron vertidos con la misma cantidad.

.Todos cambiaron a un color similar.
.Todas las leches poseen proteinas.

Diferencias:
.La leche es mas espesa que la clara del huevo.
. La leche tiene un color mas palido que la clara del huevo.
. Para que reaccionara la clara del huevo se le tuvo que agregar agua y a la leche no.
.La tonalidad de violeta en las leches.

3.La desnaturalización irreversible de la proteína de la clara de huevo y pérdida de solubilidad, es causadas por la solucion de Biuret. Cuando la soluciona es combinada con  la clara   las moléculas con lo que se desorganiza la envoltura acuosa de las proteínas y se desnaturalizan. Destruye los enlaces débiles desorganizando la estructura de esta forma el lado hidrófobo interactuara con el medio acuoso.

 Ademas en el proceso ocurre la desnaturalización de una proteína, llamada ovo albumina, la cual posee histidina,isoleusina, leusina, lisina, metionina, fenilalanina, triptofano, valina, de aminoácidos.
La desnaturalización de la ovo albumina.
La ovo albumina cambiara su forma a S-ovalbúmina, de propiedades algo diferentes a la original.
Lo cual esto nos permitio apreciar el cambio de color que hubo en la clara.

María Daniela Ocampo Siliezar B25 

1.   La solución de Biuret detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con más de dos enlaces peptídicos, los cuales son la reacción del grupo carboxilo de un aminoácido con el grupo amino de otro, en sustancias de composición desconocida. Está hecho de hidróxido potásico y sulfato cúprico, el hidróxido de potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino para que ésta tenga lugar. El reactivo es de color azul y cambia a violeta en presencia de proteínas y se torna a un color rosado cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. Esta reacción únicamente sucede cuando hay péptidos y proteínas no solo aminoácidos, ya que los aminoácidos se liberan cuando se rompe un enlace peptídico. Eso es lo que se comprobó al derramar la solución Biuret en la clara de huevo, el agua y la leche deslactosada, descremada y entera, la presencia de proteínas. En el caso del agua, al agregarse la solución Biuret no cambio de color a violeta simplemente se torno a un color azul porque ese es el color de la solución, esto se debió a que el agua no contiene proteínas y por lo tanto no contiene aminoácidos, su composición consta de dos atamos de hidrógeno y uno de oxígeno, no contienen enlaces peptídicos, es por eso por lo que no reaccionó con la solución Biuret. En el caso de la leche descremada, la leche descremada es la leche a la que se le han eliminado los ácidos grasos mediante centrifugado, al no contener grasa la leche descremada aporta menos calorías que la leche entera pero las cantidades de proteínas, azúcares la lactosa y calcio son las mismas. Por esta razón es que si reaccionó positivamente con la solución porque si contiene proteínas y se tronó de un color violeta. En la leche entera se dio el mismo caso que con la leche descremada, ya que las proteínas que se encuentran en la leche son apreciables y de esta cantidad se pueden distinguir las proteínas del suero y las caseínas; además la leche contiene diversos enzimas, algunas con actividad antimicrobiana o anticuerpos.  En el caso de la leche deslactosada, como su nombre lo dice es leche sin lactosa, la cual es el azúcar que se encuentra en la leche. La leche deslactosada con tienen una enzima llamada lactasa la cual degrada el nutriente de la leche a nivel intestinal, es por es que esta también reaccionó con la solución Biuret. Por último, en el caso de la clara de huevo con agua, la clara está compuesta casi en 90% por agua, el resto son proteínas con vestigos de minerales, materia grasa, vitaminas y glucosa. La clara se puede considerar como un sistema proteico con puesto por fibras de ovomucina, la cual es una proteína fibrosa, incluidas en la solución acuosa de numerosas proteínas globulares; la capa dense de la clara se diferencia de la capa fluida en que la primera tiene 4 veces más fibras de ovomucina, como era el caso de nuestra clara de huevo en el experimento. La ovoalbúmina es la principal proteína que se encuentra en la clara del huevo, es por eso por lo que también reacciono positivamente con la solución Biuret.  (En el laboratorio no ocurrió debido a que la solución Biuret estaba vencida, pero esto debió haber ocurrido)

2.  Similitudes:

· La clara de huevo y la leche deslactosada, descremada y entera reaccionaron positivamente con la solución Biuret porque se tornaron en un color morado ya que poseen proteínas.

·    La leche y el agua tienen la misma cantidad vertida en los tubos de ensayo.

· El huevo y la leche son dos alimentos nutritivos y necesarios para el buen funcionamiento del organismo debido a todas las propiedades que poseen, lo cual coincide con las proteínas y el experimento porque se detectó la presencia de estas por medio de la solución Biuret.  

·  La leche deslactosada, descremada y entera, aunque tienen ciertas diferencias en cuanto a la lactosa y la grasa, todas poseen proteínas.

            Diferencias:

·  El agua no reaccionó con la solución Biuret debido a que esta no contiene proteínas, la única que no reaccionó.

· La clara de huevo es un poco menos espesa que la leche debido a la diferente consistencia que las dos poseen, la leche es mas espesa y la clara de huevo es mas ligosa.

·    El color de la leche es un morado más claro que el de la clara de huevo, el de la clara de huevo es un color más intenso.

·    El volumen de la leche se redujo porque se espeso mas que la clara de huevo.

·    A la clara de huevo se le tuvo que agregar agua.

  3. En la reacción del huevo con el alcohol etílico se pudo observar la desnaturalización de la proteína ovo albumina, que posee el huevo, debido al alcohol.  La desnaturalización de las proteínas es el cambio o la variación de la estructura espacial de misma o de las cadenas de aminoácidos que las conforman. Al producirse la desnaturalización de las proteínas solo se conserva el enlace lineal y así cambia su forma original, lo cual tiene como consecuencia un defecto en su función biológica. Los principales factores que pueden causar la desnaturalización de las proteínas pueden ser varios como: La temperatura, es decir el calor excesivo, la alteración de la concentración, la agitación intensa, polaridad de solvente o fuerza iónica. Sus consecuencias también son variadas como: cambio en la viscosidad, disminución de la solubilidad, perdida de propiedades biológicas, cambio de color, textura, olor sabor, etc. Este fenómeno puede ser reversible o renaturalización y puede ser irreversible o coagulación, el grado de reversibilidad dependerá del nivel de variación que sufrieron las estructuras al producirse la desnaturalización. En el caso de la clara de huevo con el alcohol etílico se produjo la desnaturalización de proteínas, ya que el alcohol etílico provoco en la clara de huevo que las proteínas que se encontraban en este provocaran una alteración en su estructura, provocando la desnaturalización de estas. La ovo albumina es la proteína del huevo, especialmente de la clara, y el alcohol etílico fue el que provocó el cambio en la estructura de esta. Es por ello que se observó un cambio en la apariencia de la clara de huevo, esta se empezó a tornar blanca y sólida, pero al mismo tiempo espesa y ligosa; al mismo tiempo el huevo se va deshidratando, el agua sale de sus tejidos y el alcohol entra. Es por eso que el alcohol etílico se utiliza para limpiar y para productos desinfectantes ya que limpia la grasa y la disuelve, al igual que desnaturaliza las proteínas disolviendo lis lípidos d las membranas celulares de las bacterias.  

4. Conclusiones:

ü  Al agregarse solución de Biuret en alguna sustancia se detectará la presencia de proteínas de esta, si la reacción es positiva, es decir si se detecta la presencia de proteínas se tornará a un color morado o de un color rosado si se detecta la presencia de polipéptidos de cadena corta, de lo contrario, si no se detecta la presencia de proteínas, se observará un color azul que es el de la colusión Biuret, así como sucedió con el agua.

ü  La estructura nativa de las proteínas se presenta cuando la proteína no ha sufrido ningún cambio en su interacción con algún disolvente, la desnaturalización de las proteínas, al ser un cambio o perdida estructural de las mismas, altera dicha estructura, haciendo que la proteína pierda sus funciones fundamentales y se vuelva inservible. 

ü  La reacción de Biuret es producida por los péptidos y por las proteínas, no por los aminoácidos, ya que, aunque estos conformen a las proteínas, la solución de Biuret detecta la presencia de dos o más enlaces peptídicos y los aminoácidos se liberan cuando se destruye un enlace, por lo tanto, ya no existiría enlace ni reacción de Biuret.

ü  Existen diferentes tipos de desnaturalizadores para todas las proteínas de sustancias que las contengan, como fue en el caso de la clara de huevo, el desnaturlizador fue el alcohol etílico. Estos desnaturalizadores cambian o alteran la estructura de las proteínas.

Bibliografía

-Araneda, M. (17 de abril de 2018). HUEVOS Y DERIVADOS. COMPOSICIÓN Y PROPIEDADES. Recuperado el 14 de mayo de 2018, de Edualimentaria.com : http://www.edualimentaria.com/huevos-composicion-y-propiedades

-Araneda, M. (20 de abril de 2018). LECHE Y DERIVADOS. COMPOSICIÓN Y PROPIEDADES. Recuperado el 14 de mayo de 2018, de Edualimentaria.com : http://www.edualimentaria.com/leche-y-derivados-composicion-y-propiedades

-Cancela, M. d. (s.f.). Leche deslactosada o sin lactosa: conoce cómo se produce. Recuperado el 14 de mayo de 2018 , de Innatia.com : http://www.innatia.com/s/c-alimentos-lactosa/a-leche-deslactosada.html

-Cevallos, R. A. (27 de junio de 2013). Obtención e identificación de proteínas encontradas en la leche y en la clara de huevo . Recuperado el 14 de mayo de 2018, de Slideshare.net: https://es.slideshare.net/tato762/obtencin-e-identificacin-de-protenas-encontradas-en-la-leche-y-en-la-clara-de-huevo

-Chavez, S. I. (11 de septiembre de 2014). Desnaturalización del huevo. Recuperado el 18 de mayo de 2018, de Prezi.com : https://prezi.com/o8ya5dh-rfd6/desnaturalizacion-del-huevo/

-EDUCACONBIGBANG. (3 de julio de 2014). El huevo en alcohol: parece frito pero no lo está. Recuperado el 18 de mayo de 2018, de Educacionbigbang.com : https://educaconbigbang.com/2014/07/el-huevo-en-alcohol-parece-frito-pero-lo-esta/

-Leche desnatada. (s.f.). Recuperado el 14 de mayo de 2018, de Biotrendies.com: https://biotrendies.com/lacteos/leche-desnatada

-Llerena, M. (8 de julio de 2014). REACCIÓN DE BIURET. Recuperado el 14 de mayo de 2018, de Blogspot.com: http://bioquimicamarzo-julio.blogspot.com/2014/07/reaccion-de-biuret.html?m=1

-Ramplona, E. (s.f.). El proceso de desnaturalización de las proteínas. Recuperado el 18 de mayo de 2018, de Infotopo.com: https://www.infotopo.com/salud/nutricion/desnaturalizacion-de-las-proteinas